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技術(shù)文章

Technical articles

2023
6-5

ELISA技術(shù)綜述（五）
其他內(nèi)容：酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)的多酶級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)：一、AP底物放大系統(tǒng)substrateampiificationsystemAP可催化底物NADP+脫磷酸而生成NAD+(輔酶1)，以乙醇作還原劑，在醇脫氧酶催比下，乙醇脫氫，NAD+還原為NADH，NADH在黃遞酶的催化下脫氫，同時(shí)四唑鹽(tetrazoliim)被還原成有色的甲蠟(formazan)。AP不斷催化NAD+生成，NAD+與NADH循環(huán)轉(zhuǎn)化，不斷生成甲蠟。整個(gè)反應(yīng)周期由AP及醇脫氫酶、黃遞酶組成酶級(jí)聯(lián)，每個(gè)AP分子...
2023
5-29

ELISA技術(shù)綜述（四）
2.4結(jié)合物的保存酶標(biāo)抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，保存不當(dāng)，極易失活。高濃度的結(jié)合物較為穩(wěn)定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過(guò)程中引起活力的減低，而且使用時(shí)需經(jīng)復(fù)溶，頗為不便。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長(zhǎng)時(shí)間保存。早期的ELISA試劑盒中的結(jié)合物一般均按以上兩種形式供應(yīng)，配以稀釋液（見(jiàn)3.2.5）臨用時(shí)按標(biāo)明的稀釋度稀釋成工作液。現(xiàn)在較先進(jìn)的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時(shí)不需再行稀釋，在4-8℃保存期...
2023
5-22

ELISA技術(shù)綜述（三）
以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。1.2包被的方式將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，...
2023
5-15

ELISA技術(shù)綜述（二）
ELISA的商品化試劑盒成分和分類：在臨床檢驗(yàn)或者科研檢測(cè)中，ELISA實(shí)驗(yàn)通常有商品試劑盒提供。ELISA試劑盒中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；（5）酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標(biāo)本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液。1、免疫吸附劑已包被抗原...
2023
5-8

ELISA技術(shù)綜述（一）
ELISA原理ELISA利用抗原抗體之間專一性結(jié)合之特性，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)；由于結(jié)合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設(shè)計(jì)其結(jié)合機(jī)制後，配合酵素顯色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進(jìn)行定量分析。根據(jù)待測(cè)樣品與結(jié)合機(jī)制的不同，ELISA可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"間接法"(indirect)、以及"競(jìng)爭(zhēng)法"(Competitive)三種為主，以下為各種方法之介紹。ELISA分類見(jiàn)...
2023
5-4

ELISA試劑盒中的抗體
在ELISA試劑盒中運(yùn)用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動(dòng)物的抗血清，制備較簡(jiǎn)略，但抗血清成分凌亂，除含針對(duì)抗原（多個(gè)表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對(duì)要低于單抗，且制備周期長(zhǎng)，批間差異較大。而單抗僅針對(duì)抗體的單一表位，ELISA試劑盒親和力和特異性均較多抗高，且制備技能老練，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點(diǎn)的單一也正是其缺陷之地址，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體運(yùn)用同一單抗，則由于結(jié)合位點(diǎn)的短少，簡(jiǎn)略構(gòu)成假陰．性成果。在...
2023
4-24

植物微囊藻毒素LR(MC-LR)elisa試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T1.2pg/mL-40pg/mL使用目的：本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中微囊藻毒素LR(MC-LR)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物微囊藻毒素LR(MC-LR)水平。用純化的植物微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物微囊藻毒素LR(MC-LR)，再與HRP標(biāo)記的微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物...
2023
4-19

ELISA中分析非特異性顯色
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)自1971年自問(wèn)世以來(lái)，以其敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便、安全，而廣泛應(yīng)用于臨床診斷，開(kāi)創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問(wèn)題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見(jiàn)[1]。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別...

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